谁设计、制造了新冠病毒（四）拉尔夫·巴里克与肺研究所 1

信口雌黄、凭空捏造、无中生有不会带来真相，谎言、伪证、掩耳盗铃不会带来真相。
真相出自可核实的证据，真相出自经得起推敲的必要证据细节，真相出自信息甄别、信息对照。
新冠病毒的来源真相，新冠疫情的发生真相不应是小圈子里的秘密。
接续：谁设计、制造了新冠病毒（四）北卡肺研究所与ENaC
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回顾：新冠S蛋白与ENaC-α，北卡肺研究所与ENaC
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上一篇文章指出：
1、新冠病毒S蛋白与人类ENaC-α拥有相同的长FCS序列，新冠病毒S蛋白S1亚基、S2亚基交界处（S1/S2处）的长furin切割序列，人类ENaC-α（上皮钠离子通道的α亚基）的长furin切割序列，同为RRAR'SVAS。
在新冠病毒中，八氨基酸序列RRAR'SVAS是S蛋白aa（amino acid，氨基酸）序列的第683-690氨基酸（残基），在人类ENaC-α中，同一序列是aa序列的第201-208氨基酸（残基）。
图a：新冠、三种新冠“近亲”S1/S2附近的aa序列对照。
图b：新冠S蛋白、人类ENaC-α、小鼠ENaC-α的长furin切割序列对照。
2、
从自然演化的角度看，新冠S蛋白与人类ENaC-α共有RRAR'SVAS序列这一结构巧合是不可思议的“零概率事件”，这至少体现在：
a)新冠病毒是S蛋白含有RRAR'SVAS序列的唯一一种冠状病毒，新冠之外的所有冠状病毒S蛋白皆不含有RRAR'SVAS序列。
b) 就人类而言，RRAR'SVAS序列只存在于ENaC-α之中，更具体点说，ENaC-α是aa序列含有RRAR'SVAS的唯一一种人体蛋白结构。
c) RRAR'SVAS序列在生物界极为罕见，ENaC-α含有RRAR'SVAS的生物物种仅有六种，其中五种是灵长类动物：人类（human）、黑猩猩（chimpanzee）、倭黑猩猩（bonobo）、猩猩（orangutan）、大猩猩（gorilla），唯一一种ENaC-α含有RRAR'SVAS序列的非灵长类物种是一种发现于欧洲和西亚的叫作pipistrellus kuhlii的蝙蝠。
d) 在新冠病毒近3万个核苷酸（碱基）位点中，RRAR'SVAS恰巧出现在对感染、致病能力至关重要的S蛋白S1亚基、S2亚基交界处。
3、新冠病毒S1/S2处的长furin切割序列不是自然演化产生的，是人为设计、赋予的。
4、ENaC是北卡教堂山分校肺研究所（肺研究中心）长期的核心研究领域（之一），在2001年至2018年间，北卡肺研究所至少发表了十篇专门研究ENaC微观结构与内在机能的分子生物学/生物化学论文，该所在同一时期还发表了一些与ENaC高度相关的论文（数量未作统计，笔者提供了两篇示例）。
是谁，将人类ENaC-α的长furin序列RRAR'SVAS引入到了新冠S蛋白S1/S2位点处？谁才是新冠病毒的核心设计者？
是北卡肺研究所的ENaC专家吗？北卡肺研究所在新冠病毒产生中充当的角色难以确定，他们可能是新冠病毒设计工作的参与者或建议者，亦或是有意、无意的idea贡献者；但可以肯定，他们不会是新冠病毒的核心设计者。
早前的
谁设计、制造了新冠病毒（四）匪夷所思
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一文指出：
由已发表的一系列科学论文、文献可知，新冠病毒集众多冠状病毒、非冠状病毒（如逆转录科慢病毒属的艾滋病病毒、丝状病毒科的埃博拉病毒、正黏液病毒科的甲型流感病毒、黄病毒科黄病毒属的登革热病毒等等）的结构、能力、特性于一身，它兼具十几种受体结合能力，拥有完备的宿主免疫系统对抗能力（包括免疫破坏、免疫屏蔽与免疫逃避、免疫干扰与免疫抑制等）；新冠病毒还兼具非病毒生物（如人类）、微生物（十几种致病细菌）、非生物毒素（如金黄色葡萄球菌肠毒素B）的基因或蛋白结构。新冠病毒不是随机、无目的自然演化的产物，新冠病毒是人为精心设计的跨科属、跨界集大成者。
集各种冠状病毒、非冠状病毒、非病毒生物、微生物、非生物毒素结构、能力、特性于一身的跨界集大成者-新冠病毒必定出自老牌病毒专家之手，它的核心设计者必定是一个长期从事病毒研究、病毒改造，功能增益（Gain-of-function，GoF）经验异常丰富、积淀异常深厚的资深病毒学家、微生物学家。新冠病毒的设计、研发团队（或二次设计者）很可能还包括艾滋病病毒、埃博拉病毒、免疫学等领域的资深专家。
设计、制造新冠病毒这件事，不是长年跋山涉水、钻山穿洞搜寻、搜集蝙蝠样本，分离、测序、鉴定蝙蝠冠状病毒，从未发表过功能增益研究论文，2016年才研发出反向遗传系统，2017年才首次尝试冠状病毒无痕迹改造技术，病毒合成、改造技术落后世界顶尖水平16年的武汉病毒研究所、石正丽们所能做到的。
系统性地回避、隐匿、不宣传、不普及、冷处理新冠病毒种种匪夷所思的结构、能力、特性，是为了维持谎言、伪证、假相，转移视线，隐藏新冠病毒的真正设计、制造者，掩盖新冠病毒的真正来源地和新冠疫情发生的真正原因。
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Ralph S. Baric（拉尔夫·巴里克）
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我们已经知道，北卡罗来纳大学教堂山分校（University of North Carolina at Chapel Hill，UNC at CH）有一批长期研究ENaC的顶尖分子生物学家、生物化学家；巧合的是，北卡教堂山分校还有一位世界最顶级的冠状病毒研究权威Ralph S. Baric（拉尔夫·巴里克）。Ralph S. Baric研究冠状病毒近40年，发表冠状病毒论文二百余篇，合成、改造冠状病毒无数，被誉为“冠状病毒合成、改造之父”，他同时是功能增益研究的坚定支持者和执着的长期身体力行者。Ralph S. Baric不仅是当今世界上最有能力、最富技术积累和经验积淀以设计、制造新冠病毒的人，而且，如笔者已经多次指出，还将不断指出、介绍的，新冠病毒的多项结构、能力、特性，如S蛋白的RBD关键氨基酸、S蛋白的furin切割序列、S蛋白的三关节式铰链结构、逆转录RNA-人类DNA整合特性，S蛋白异常广泛的受体结合能力（新冠S蛋白可结合十几种受体，集多种冠军病毒、非冠状病毒的受体结合能力于一身）、异常广泛的各种细胞感染能力等等等等，都与Ralph S. Baric的论文内容、研究内容存在高度关联，如此之多的高度关联绝非偶然的巧合。
Ralph S. Baric是北卡罗来纳大学（UNC）教堂山分校流行病学系（Department of Epidemiology）教授，并兼任UNC教堂山分校微生物学和免疫学系（Department of Microbiology and Immunology）教授（也有资料称Ralph S. Baric是UNC微生物学和免疫学院流行病学系教授），他还是UNC莱恩伯格综合癌症中心（The Lineberger Comprehensive Cancer Center）的成员。最新的UNC介绍资料显示，流行病学系隶属于UNC吉林斯公共卫生学院（The UNC Gillings School of Public Health），微生物学和免疫学系隶属于UNC医学院（The UNC School of Medicine），值得注意的是，北卡肺研究所也隶属于UNC医学院。
疫情发生后的2021年4月，Ralph S. Baric入选美国国家科学院院士，次年4月，他又入选美国艺术与科学院院士。美国国家科学院与美国艺术与科学院是两个不同的机构。
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Ralph S. Baric与北卡肺研究所
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北卡肺研究所的研究领域与Ralph S. Baric（团队）的研究领域高度相关且相辅相成。肺、呼吸道的结构（包括ENaC）、机能、发病机制是肺研究所的主要研究领域，而Ralph S. Baric的研究对象—大多数冠状病毒的最首要感染部位，也正是肺、呼吸道。
Ralph S. Baric实验室与肺研究所不仅同属北卡医学院，而且双方关系极为密切，双方交流、合作极为频繁。
a) 双方人员经常合作开展研究，联名发表论文，包括大量GoF研究，这些研究通常涉及人体感染、致病实验，以及通过实验室手段（如人工改造、人体组织培养或其它手段），使冠状病毒具有人体感染、致病能力，或可跨物种感染、传播的有效尝试；
b) 双方有共同的研究成员或接口人，有些肺研究所成员如Raymond J Pickles，同时隶属于Ralph S. Baric所在的微生物学和免疫学系，在北卡医学院内跨系所任职，同时或交叉性地参与双方的研究和论文发表；
c) 从2007起，近十多年来，Ralph S. Baric实验室做了大量的人类感染、致病实验。Ralph S. Baric实验室试验病毒对人类感染、致病能力所用的人体肺脏、人体气道样本，及人体肺脏、气道上皮细胞培养物，通常由肺研究所提供或代为购买、获取（自捐献者）；
d) Ralph S. Baric实验室不仅使用肺研究所提供的人体器官、组织样本，人体细胞培养物进行体外感染实验，还使用人源化转基因小鼠进行体内感染实验。Ralph S. Baric实验室模拟检验冠状病毒人体体内感染、致病效果所用的人源化小鼠，是在肺研究所（下属动物模型核心）发明的转基因小鼠基础上进一步杂交得到的。
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人源化小鼠（hACE2转基因小鼠）
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人源化小鼠是一种拟人化的转基因小鼠，这种小鼠肺、脑、肝、肾和胃肠道等部位的细胞跨膜受体—mACE2（mouse ACE2)被转基因技术修改、替换为hACE2（human ACE2）。在病毒研究中，除使用人体器官、组织样本，人体细胞培养物进行体外感染实验外，还可能做体内感染实验，体内实验通常不会使用真实的人类活体，而是以模拟的“人体”替代，人源化转基因小鼠就是这样一种人类活体模拟物。人源化小鼠可检验病毒（主要是改造产生的冠状病毒，自然来源的蝙蝠冠状病毒仅有少数几种有hACE2结合能力）S蛋白的hACE2结合能力，进而模拟检验、评估冠状病毒的人类体内感染、致病效果。
2016年3月14日，Ralph S. Baric团队在PNAS(Proceedings of National Academy of Sciences，美国国家科学院院刊)期刊发表了一篇重要的嵌合病毒论文：
SARS-like WIV1-CoV poised for human emergence
类SARS冠状病毒WIV1-CoV准备出现在人类中（类SARS冠状病毒WIV1-CoV有潜在的人类感染风险）
https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.1517719113
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26976607/
这篇论文的新冠溯源价值远高于巴里克团队2015年11月9日发表于Nature Medicine（自然医学）期刊的另一篇广为人知的嵌合病毒论文。
论文用普通小鼠和人源化小鼠作对比体内感染实验。实验结果显示，嵌合病毒WIV1-MA15只能使普通小鼠产生轻微症状；但当感染对象由普通小鼠换成人源化小鼠后，WIV1-MA15的感染、复制、致病能力大大增强。WIV1-MA15在人源化小鼠肺中的复制滴度比在普通小鼠肺中高100倍；部分10-20周龄的被感染人源化小鼠体重减轻超过10%；WIV1-MA15在人源化小鼠大脑中的复制比在肺中更强劲，部分人源化小鼠患上了严重的脑炎并致死。
WIV1-MA15是蝙蝠冠状病毒WIV1的刺突蛋白（S蛋白）与SARS-CoV MA15的骨干嵌合而成的病毒。SARS-CoV MA15是Ralph S. Baric团队在实验室中培养的SARS病毒（SARS-CoV）小鼠适应性变异体。
对比实验表明，WIV1的S蛋白非常适合结合hACE2；用WIV1的S蛋白或RBD（Receptor Binding Domain，受体结合域，S蛋白S1亚基的一部分）或RBD关键氨基酸可以构建出非常适合感染人类，人体复制能力、人体致病能力非常强的冠状病毒，所得的冠状病毒将具有大脑感染、破坏能力。
蝙蝠冠状病毒WIV1、2016年PNAS论文与新冠病毒的渊源不止如此，有关情况后续文章还将展开、介绍，我们回归人源化小鼠这一议题。
论文“Materials and Methods（材料和方法）”部分的“Generation and Infection of ACE2 Tissue-Specific Transgenic Mice（ACE2 组织特异性转基因小鼠的产生和感染）”小节介绍了设计、产生人源化转基因小鼠的方法和步骤，有关内容如下：
Transgenic mice with airway-targeted overexpression of human ACE2 were generated by microinjection of fertilized C3H × C57BL/6 (C3B6) F1 hybrid oocytes with an expression cassette consisting of the HFH4/FOXJ1 lung ciliated epithelial cell-specific promoter elements and the coding region of ACE2 cDNA in a pTG1 vector (11) (UNC Animal Model Core). Founder mice were crossed to C3B6, producing human ACE2-transgenic mice that were each previously tested for transgene expression as described in SI Materials and Methods. 
通过显微注射受精的C3H×C57BL/6（C3B6）F1杂交卵母细胞，携带在pTG1载体（11）（UNC动物模型核心）中由HFH4/FOXJ1肺纤毛上皮细胞特异性启动子元件和ACE2 cDNA（ACE2的互补DNA）编码区组成的表达盒，产生气道靶向过表达人类ACE2的转基因小鼠。（再）将这种初始转基因小鼠与C3B6杂交，（进而）产生人类ACE2转基因小鼠，每只小鼠（在用于感染实验前）都事先测试（验证）了（人类ACE2的）转基因表达，如SI材料和方法中所述。
有关术语、名词完全可以忽略，把握如下大意即可：先产生一种初始转基因小鼠，而后将其与一种叫做C3B6的小鼠杂交，产生研究所用的hACE2转基因小鼠。
初始转基因小鼠是依照参考论文(11)产生的，(11)指UNC动物模型核心（UNC Animal Model Core）发表的如下Cell-Molecular Therapy（细胞-分子疗法）论文：
Targeting expression of a transgene to the airway surface epithelium using a ciliated cell-specific promoter
（使用纤毛细胞特异性启动子将转基因靶向表达到气道表面上皮细胞）
https://www.cell.com/molecular-therapy-family/molecular-therapy/fulltext/S1525-0016(03)00221-1
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14529837/
这是一篇设计、制造转基因动物（包括小鼠）的论文。论文四位作者是：Lawrence E Ostrowski，James R Hutchins，Kelly Zakel，Wanda K O'Neal，按论文提供的信息，作者所属单位皆为北卡肺研究所：Cystic Fibrosis/Pulmonary Research and Treatment Center, University of North Carolina at Chapel Hill。四位作者中的Wanda O'Neal 是UNC动物模型中心（Animal Model Core）的Director，UNC动物模型核心是UNC肺研究所的下属单位。
这篇论文发表于2003年10月，Cell期刊收到论文的时间为2003年4月24日。
至此可知，Ralph S. Baric团队在2016年3月PNAS论文研究中进行人体体内模拟感染实验所用的人源化转基因小鼠，使用了肺研究所下属动物模型核心的转基因技术，前者是对后者进一步杂交得到的。北卡肺研究所-动物模型核心发明转基因小鼠的时间不晚于2003年4月。
北卡肺研究所动物模型核心的主页
The Animal Models Core _ Marsico Lung Institute
https://www.med.unc.edu/marsicolunginstitute/core-facilities/mousemodelscore/
介绍说：
The Animal Models Core has been involved in the generation and characterization of over 25 lines of genetically modified mice (transgenic, knockout, or knockin) for a variety of collaborators over the years, and has also conducted studies in other species (rabbit, hamster, rat, guinea pig) for investigator-initiated projects. 
多年来，动物模型核心为各种合作者提供了超过 25 种转基因小鼠（转基因、敲除或敲入）的生成和表征，并且还从事其他物种（兔子、仓鼠、 大鼠、豚鼠）的（转基因）研究以服务于研究者发起的项目。
疫情发生后的2020年5月21日，一批中国研究人员（主要来自武汉病毒研究所，有一人来自华中科技大学同济医学院法医学系，另有一位外籍署名作者，论文通讯作者为武汉所的石正丽和杨兴娄）在Cell期刊发表了一篇新冠病毒研究论文：
Pathogenesis of SARS-CoV-2 in Transgenic Mice Expressing Human Angiotensin-Converting Enzyme 2
SARS-CoV-2 在表达人类ACE2 的转基因小鼠中的发病机制
https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(20)30622-X
Human Angiotensin-Converting Enzyme 2，人类血管紧张素转换酶2，即人类ACE2，通常简写为human ACE2或hACE2。
论文“Experimental Model and Subject Details（实验模型和受试者/试验物详细信息）”章节之下的“HFH4-hACE2 mice（HFH4-hACE2小鼠）”小节中说：
The transgenic mice (HFH4-hACE2 mice) expressing the human ACE2 protein (hACE2) under mixed genetic backgrounds (C3H, C57BL/6) were obtained from Ralph S. Baric’s lab (Menachery et al., 2016). 
在混合遗传背景（C3H、C57BL/6）下表达人类ACE2 蛋白（hACE2）的转基因小鼠（HFH4-hACE2 小鼠）获自Ralph S. Baric 实验室（Menachery 等人，2016 年）。
参考论文(Menachery et al., 2016)就是本文篇首提到的Ralph S. Baric团队2016年3月14日发表的PNAS论文，该论文的第一作者是Vineet D. Menachery（他也是2015年11月Nature Medicine嵌合病毒论文的第一作者），通讯作者是Ralph S. Baric。
在中国学者2020年5月21日的Cell期刊论文中，Ralph S. Baric列名第十七作者（除两位通讯作者外的倒数第二位作者），他也是该论文唯一一位外籍作者。论文“Author Contributions（作者贡献）”部分指出：
; Resources, J.M., X.W., and R.S.B.; ...; Writing – Review & Editing, X.-L.Y., Y.-W.Z., R.S.B., P.Z., and Z.-L.S.; 
即，Ralph S. Baric R.S.B）是三位Resources（资源）提供者之一；他还参与了论文手稿的Writing – Review & Editing（笔者推测，他应该没有参与所向手稿的写作，而是提供了一些review意见）。Ralph S. Baric提供的资源应该就是人源化转基因小鼠（HFH4-hACE2小鼠）。这也许可以看作是石正丽的一次“投桃报李”，当年，并未参加嵌合病毒GoF研究的石正丽，因向Ralph S. Baric提供蝙蝠冠状病毒SHC014的S蛋白基因序列而被Baric友情列名为2015年11月自然医学嵌合病毒论文的第14作者（通讯作者Ralph S. Baric之外的倒数第一作者），由此“成为”“参与”这项危险研究的一分子，更有人称2015年11月自然医学论文是石正丽（团队）发表的。
2015年11月自然医学嵌合病毒论文指Ralph S. Baric团队2015年11月9日发表的如下Nature Medicine论文：
A SARS-like cluster of circulating bat coronaviruses shows potential for human emergence
（一个类似SARS的蝙蝠冠状病毒群显示了产生人类流行疫情的潜力）
https://www.nature.com/articles/nm.3985
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26552008/
这是Ralph S. Baric团队最广为人知的一篇论文，这篇论文屡屡被张冠李戴或分享到武汉病毒研究所和石正丽头上。维基百科“拉尔夫·巴里克”词条称：
巴里克與中國科學院武漢病毒研究所的石正麗合作，製作含有SHC014病毒刺突蛋白、且已適應小鼠體內環境的SARS-CoV重組病毒（SHC014-MA15），發現此病毒可感染人類細胞與小鼠，顯示自然界許多蝙蝠SARSr-CoV可能具有感染人類的潛力[11]。此研究於2015年發表，被部分科學家認為風險過大[12][13]。
拉尔夫·S·巴里克 - 维基百科，自由的百科全书
https://zh.wikipedia.org/wiki/%E6%8B%89%E5%B0%94%E5%A4%AB%C2%B7S%C2%B7%E5%B7%B4%E9%87%8C%E5%85%8B
B从A那里要了一种钢材，而后B使用这种钢材，嵌合镍、铬等金属，设计、制造了一种前所未见的杀伤力巨大的大炮。试问，这种大炮是B设计、制造的，还是B与A共同设计、制造的？以下两种说法，哪一种说法合乎事实：
1、B与A合作，设计、制造了一种前所未见的、杀伤力巨大的大炮；
2、B利用A提供的钢材，设计、制造了一种前所未见的、杀伤力巨大的大炮。
另一个问题：A是否参与了大炮的设计、制造？
关于武汉病毒研究所石正丽、葛行义（论文第9作者）与2015年11月Nature Medicine论文真实关系的详细分析、说明，请参阅：
批驳王文清网友的新冠溯源文章
https://club.6parkbbs.com/chan2/index.php?app=forum&act=threadview&tid=13522972
关于人源化小鼠，话说了很多，要点其实就两个：Ralph S. Baric实验室在冠状病毒研究中使用的人源化转基因小鼠基于肺研究所的转基因小鼠；武汉病毒研究所所用的人源化转基因小鼠来自Ralph S. Baric实验室（Ralph S. Baric实验室可能提供了小鼠本身或技术）。
（未完待续）
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