| 送交者: 苦难与荣耀[☆★★声望品衔11★★☆] 于 2023-07-12 15:50 已读 4069 次 | 苦难与荣耀的个人频道 |
接续：“万能”受体适配器--新冠S蛋白 0 https://club.6parkbbs.com/chan2/index.php?app=forum&act=threadview&tid=13539189 6park.com有些事实需要回避，不便公开申明、反复强调，不便广而宣告，广为讨论，那等于将真相搬出隐蔽、黑暗的角落，摆放到没有遮蔽的阳光下。 6park.com新冠病毒具有泛器官、泛组织感染、破坏能力，新冠病毒能够感染、损伤几乎所有的人体器官、人体组织。未见权威组织、权威人士专门指出、明确强调这一点，但人们能够从新冠致病情况的纷纭报道中自行总结出这一事实。已论文报告或媒体报道的新冠病毒感染、致病部位遍及人体的呼吸系统、消化系统（包括胃肠道、肝脏、胰腺）、血液循环系统（包括心脏、血管、红细胞、白细胞）、泌尿系统（包括肾脏、膀胱等）、淋巴免疫系统（包括T细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞）、内分泌系统、生殖系统、大脑神经系统（包括脑组织、神经元、嗅觉、味觉细胞）。。。 6park.com公众能够自行认识到，新冠病毒的泛器官、泛组织感染、破坏能力；但普通公众难以知道，难以想象到，新冠病毒这一外在能力背后蕴含的一组震古烁今的内在能力：新冠病毒的受体结合蛋白（S蛋白）能够结合超过30种人类细胞受体（人类细胞膜蛋白）！ 6park.com坐拥30种以上人类细胞受体不是新冠病毒非凡受体结合能力的全部。新冠病毒不仅集众多冠状病毒、众多非冠状病毒的受体结合能力于一身，而且兼具细菌分泌物、人体蛋白、人类药剂的受体/蛋白结合能力。比如，新冠病毒S蛋白结合TCR（T Cell Receptor，T细胞受体）的多肽，在序列和空间结构上与葡萄球菌肠毒素B（金黄色葡萄球菌的代谢产物）高度相似；再比如，新冠病毒S蛋白结合NRP1（神经纤毛蛋白-1）受体的Cendr多肽，与NRP1的一种体内天然结合配体--VEGF-A（血管内皮生长因子-A，一种人体内的二聚体糖蛋白），在NRP1的结合结构、结合机制上非常相似；又比如，新冠病毒S蛋白结合GRP78（葡萄糖调节蛋白78）受体的四个多肽区域，与一种肿瘤化疗的药物载体Pep42（Pep42是GRP78的特异性结合配体）在序列上、在空间环状性质上，在物理、化学性质上都具有相似性。 6park.com由于新冠病毒能够结合超过30种人类细胞受体--人类细胞膜蛋白，由于这些膜蛋白驻留的细胞分布在各种人体器官、组织中，因此，各个器官、组织中的每种人体细胞的表面，几乎总有一种或多种新冠病毒可结合的膜蛋白受体，进而，几乎每一种人体细胞，都可被新冠病毒经由一种或多种受体结合途径感染。S蛋白极其广泛、惊人的受体结合能力，是新冠病毒具有泛器官、泛组织感染、破坏能力的最关键原因。 6park.com新冠病毒30种以上的受体结合能力，是前所未见的，是其它所有冠状病毒，其它所有病毒难以企及、难望颈背的。 6park.com如果新冠病毒来自自然、来自动物，那么它是前无古人的超级自然演化天才，它在远离人类的地方，无师自通，通过随机性的、无目的的自然演化，自然而然地演化出了史无前例的超级广泛、超级惊人的人类受体结合能力。它自然演化出了近亲病毒无一具有的20多种人类受体结合能力，它自然演化出了众多非冠状病毒的人类受体结合能力，它还自然演化出了细菌分泌物、人类蛋白、人类药剂的人类受体结合能力、结合结构。这样的自然演化真的自然吗？ 6park.com如果新冠病毒来自自然，来自动物，那么，刚刚在人群中出现的这种病毒，为什么对人体如此熟悉，如此了如指掌？为什么对结合人体膜蛋白受体，对感染、破坏人体细胞、组织、器官，这种病毒如此轻车熟路、得心应手、游刃有余？ 6park.com无法解释、无法面对，只能回避、躲闪、拖延、淡化、冷处理、装糊涂、隐瞒、混水摸鱼。你的声音难以得到传播和讨论，甚至得不到反驳。对某些人来说，强权即公理；对某些人来说，阵营、立场、利益决定是非；通常人们愿意相信，一种鲜有呼应、过于孤独的诉说应该是虚构的或臆想的，不会是事实、真相。尽管反面的例子在人类历史上一再发生。 6park.com下面将一一介绍新冠病毒S蛋白可结合的人类细胞受体，每一种受体都将给出论文依据。如果某些论文的介绍比较冗长，读者可一目十行或直接跳过它们，论文标题往往已可说明问题。论文细节对笔者和某些读者或许有参考价值。 6park.com- 6park.com1、ACE2 6park.com- 6park.comACE2：Angiotensin-Converting Enzyme 2，血管紧张素转换酶2，最早确认的、众所周知的新冠病毒受体。ACE2较广泛地存在于脊椎动物的呼吸、消化、血液、泌尿、生殖、视觉等系统的众多器官、组织内，但在新冠病毒的首要感染部位--呼吸道和肺部，ACE2的表达量（含量）却相当低或仅有一小部分细胞表达，在新冠病毒的另外一些感染部位，如肝脏，脑和血液中，甚至检测不到ACE2表达。 6park.comACE2也是SARS-CoV和HCoV-NL63的主要受体，HCoV-NL63是有人类致病能力的七种已知冠状病毒之一，可引发普通感冒。 6park.com对ACE2就不多作展开了。 6park.com- 6park.com2、DPP4（CD26） 6park.com- 6park.comDPP4：dipeptidyl peptidase IV，二肽基肽酶4，是一种II型（N端在胞内，C端在胞外）单次跨膜蛋白，也是一种丝氨酸蛋白酶。DPP4也叫CD26（cluster of differentiation 26，表面抗原分化簇26，白细胞/T细胞活化抗原26），它还有adenosine deaminase (ADA) complexing protein-2 （腺苷脱氨酶复合蛋白-2）等其它名称。 6park.comDPP4在众多人体器官、组织中广泛分布，如下呼吸道（支气管）、肺（特别是肺成纤维细胞）、胃肠道、肝脏、肾脏（近端肾小管）、胰腺、胸腺、前列腺、淋巴结、胎盘、血浆（及其它组织液）、中枢神经系统、受伤皮肤、肌肉等等；DPP4也广泛表达于各种活化的免疫细胞，如CD4(+)和CD8(+)T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞和巨噬细胞。 6park.comDPP4在血糖控制（是肠降血糖系统的关键调节因子）、细胞迁移、增殖、免疫等多种生理过程中发挥作用；DPP4通过调节细胞因子、趋化因子和肽激素的产生，参与免疫、炎症反应并参与、影响多种疾病的发病机制。一个例子是，糖尿病患者溃疡部位组织DPP4 水平升高是创面难以愈合的原因。 6park.comDPP4是MERS-CoV（Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus，中东呼吸综合症冠状病毒）的主要受体。MERS属于冠状病毒β谱系的C支系，新冠属于冠状病毒β谱系的B支系，虽然同处β谱系，但二者亲缘关系遥远，基因差异巨大，二者全基因组序列一致性仅为53.5%。虽然遗传关系遥远，基因差异巨大，但新冠病毒依然兼容并蓄地“继承”、兼具了非近亲MERS的DPP4受体结合能力。 6park.com新冠病毒（SARS-CoV-2）S蛋白有较强的DPP4结合亲和力，DPP4可能是新冠病毒的受体或共受体。 6park.com论文依据一： 6park.comThe MERS-CoV Receptor DPP4 as a Candidate Binding Target of the SARS-CoV-2 Spike MERS-CoV受体DPP4是SARS-CoV-2刺突的候选结合靶点 https://www.cell.com/iscience/fulltext/S2589-0042(20)30345-X 6park.com论文要点如下： 6park.com1、软件模拟计算表明，SARS-CoV-2-S（SARS-CoV-2的S蛋白，Spike蛋白）可以较高的结合亲和力结合DPP4，SARS-CoV-2-S与DPP4的结合亲和力略低于MERS-CoV-S与DPP4，及SARS-CoV-2-S、SARS-CoV-S与ACE2的结合亲和力。如下图所示： 6park.comRBD：Receptor Binding Domain，受体结合域，S蛋白S1亚基的一个子区域。 6park.com结合自由能（binding free energy）大体是两个分子/蛋白结合后的总能量与结合前总能量的差值。自发结合的两个分子/蛋白不需要外部能量（类似磁铁相异的两极），其结合过程释放能量，结合后二者的总能量降低，二者的结合自由能为负。结合自由能的绝对值等于解开结合（解离）时所需的外部能量。结合自由能越小，即负值的绝对值越大，越容易自发结合，结合亲和力越强，结合越稳固，解离所需的能量也越高。在上图中，MERS-CoV-S与DPP4的结合亲和力最强。 6park.com2、DPP4结合SARS-CoV-2-S的氨基酸残基，与DPP4结合MERS-CoV-S的氨基酸残基是相同的，即SARS-CoV-2-S、MERS-CoV-S与相同的DPP4残基作用、结合。如下图所示： 6park.com 三种病毒S蛋白RBD与两种受体的结合自由能
笔者注：层出不穷的新冠巧合。SARS-CoV-2-S、MERS-CoV-S恰好共用相同的DPP4结合残基，这可能意味着，有人参照MERS-CoV-S与DPP4的作用机制，设计出了可与同一组（4个）DPP4氨基酸作用、结合的另一套氨基酸，并将这套氨基酸应用到了SARS-CoV-2-S的RBD之中。 6park.com3、负责与DPP4作用、结合的四个SARS-2（RBD）关键氨基酸（残基）D405、E484、Y489、Q498，其中的二个D405（天冬氨酸）、Y489（酪氨酸）在SARS-CoV中的对应氨基酸与它们相同；另外的两个E484、Q498在SARS-CoV中的对应氨基酸与它们不同。E484（谷氨酸）在SARS-CoV中的对应氨基酸空缺（SARS-CoV氨基酸序列相对SARS-CoV-2氨基酸序列的一个缺失位点），Q498（谷氨酰胺）则在SARS-CoV中对应一个酪氨酸Y位点。如下图所示： 6park.com 新冠兼具SARS（ACE2）、MERS（DPP4）的受体结合能力； 右下红色虚线框显示，新冠、MERS与4个相同的DPP4氨基酸残基作用、结合。 6park.com
笔者注：这意味着，SARS-CoV如果在第一个差异位点突变新增谷氨酸E，并将第二个差异位点的酪氨酸Y突变为谷氨酰胺Q，那么，就能演化出DPP4结合能力；或者，在第一个差异位点插入谷氨酸E，将第二个差异位点的酪氨酸Y替换为谷氨酰胺Q，就可以基于SARS-CoV的氨基酸序列，设计、改造出具有DPP4结合能力的新型冠状病毒。 6park.com4、论文指出，虽然SARS-CoV-2的S蛋白具有较强的DPP4结合亲和力，但尚未实验证实DPP4可独立介导SARS-CoV-2对人体细胞的感染，因此，论文的结论是，DDP4可能作为SARS-CoV-2的候选结合靶点或共受体（协同受体）。 6park.com论文依据二： Emerging COVID-19 coronavirus: glycan shield and structure prediction of spike glycoprotein and its interaction with human CD26 新出现的COVID-19冠状病毒：刺突糖蛋白的糖链屏蔽和结构预测以及其与人CD26的相互作用 https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/22221751.2020.1739565 6park.com论文指出：COVID-19冠状病毒S蛋白的S1结构域可能与人类CD26（即DPP4）相互作用，而CD26是劫持和毒力的关键免疫调节因子。 6park.com注：S蛋白的S1 结构域即S蛋白的S1亚基，S1亚基也叫受体结合亚基，RBD是S1亚基的子区域。相应地，S2亚基也叫膜融合亚基，它富含融合肽，可介导病毒包膜与细胞膜、内体膜或溶酶体膜等细胞的膜结构发生膜融合以释放病毒RNA，开启病毒复制。 6park.com论文依据三： Unraveling the Interactions between Human DPP4 Receptor, SARS-CoV-2 Variants, and MERS-CoV, converged for Pulmonary Disorders Integrating through Immunoinformatics and Molecular Dynamics 通过整合免疫信息学和分子动力学，揭示人类DPP4受体、SARS-CoV-2变体和MERS-CoV之间的相互作用，聚焦治疗肺部疾病 https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2023.03.06.531252v1 6park.com论文指出：SARS-CoV-2的几种变体Delta、δ、α和γ具有比原始毒株更强的DPP4结合能力，增强最显著的是Delta变体，其DPP4结合亲和力非常接近MERS-CoV的DPP4结合亲和力；SARS-CoV-2的S蛋白与DPP4的相互作用影响病毒毒性，DPP4结合能力的增强更容易引发感染合并症。 6park.com论文依据四： Circulating levels of soluble Dipeptidylpeptidase-4 are reduced in human subjects hospitalized for severe COVID-19 infections 因严重COVID-19感染而住院的人类受试者中可溶性二肽基肽酶4的循环水平降低 https://www.nature.com/articles/s41366-020-00689-y 6park.com论文指出：COVID-19患者的sDPP-4（soluble DPP4/serum DPP4，可溶形式的DPP4或血清中的DPP4）水平显著降低；DPP-4在COVID-19感染中可能发挥调节作用，肥胖和2型糖尿病可能是导致重症的主要危险因素。 6park.com反对意见，这篇论文称不支持DPP4(CD26)是SARS-CoV-2的重要受体。 Does the SARS-CoV-2 Spike Protein Receptor Binding Domain Interact Effectively with the DPP4 (CD26) Receptor? A Molecular Docking Study SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合域是否与DPP4 (CD26) 受体有效相互作用？一个分子对接研究 https://www.mdpi.com/1422-0067/22/13/7001 6park.com其它相关论文： Role of Dipeptidyl Peptidase-4(DPP4) on COVID-19 Physiopathology 二肽基肽酶4(DPP4)在COVID-19 病理生理中的作用 https://www.mdpi.com/2227-9059/10/8/2026 6park.comDPP-4 Inhibitors as a savior for COVID-19 patients with diabetes DPP-4抑制剂是有糖尿病的COVID-19患者的救星 https://www.futuremedicine.com/doi/10.2217/fvl-2022-0112 6park.comDipeptidyl peptidase-4 (DPP4) inhibition in COVID-19 COVID-19中的二肽基肽酶4(DPP4)抑制 https://link.springer.com/article/10.1007/s00592-020-01539-z 6park.com- 6park.com3、NRP-1 6park.com- 6park.comNRP-1/NRP1 ：Neuropilin-1 ，神经纤毛蛋白-1，一种Ⅰ型（C端在胞内，N端在胞外）跨膜蛋白，是最早被发现的NRP家族成员，在人体多种组织（如呼吸道、心脏、血管、淋巴结、淋巴管和神经元等等）的上皮和内皮细胞中大量表达。Nrp-1还在自然调节性T细胞上高表达，是这类T细胞区别于诱导性调节性T细胞的标志。 NRP-1与另一种神经纤毛蛋白NRP-2参与各种生理过程，包括免疫突触形成、免疫应答调节、心脏发育、血管生成、淋巴管生成、神经元发育、神经嵴细胞迁移、调节生长因子信号传导等等。NRP-1和NRP-2与癌症、神经系统疾病及心血管疾病的发病机制有关。 6park.comNRP-1也是EBV和HTLV-1的感染受体或细胞进入因子。 6park.comEBV：Epstein-Barr virus，爱泼斯坦-巴尔病毒，即人类疱疹病毒第四型，B淋巴瘤和鼻咽癌的致病因； HTLV-1：Human T-cell lymphotropic virus type-1，人类T细胞嗜淋巴细胞病毒1 型，成人T细胞白血病的病原体。 6park.com就SARS-CoV-2而言，NRP-1是ACE2的辅助受体，当与ACE2同时存在于细胞表面时，NRP-1能大幅提升SARS-COV-2的感染能力。 6park.com论文依据一： Neuropilin-1 facilitates SARS-CoV-2 cell entry and infectivity Neuropilin-1促进SARS-COV-2细胞进入和感染 https://www.science.org/doi/full/10.1126/science.abd2985 6park.com论文要点摘录如下： 6park.com1、SARS-CoV-2（假病毒）不能感染仅表达NRP1的人肾HEK-293T细胞（下图未体现这一点），但当NRP1与ACE2及TMPRSS2同时在HEK-293T细胞中表达时，SARS-CoV-2对HEK-293T细胞的感染能力得到大幅提升（HEK-293T细胞自身不表达ACE2和NRP1，所用的是转染了相应蛋白基因的细胞）。 6park.com SARS-CoV-2的四个DPP4结合氨基酸在SARS-CoV中的对应氨基酸
6park.com依据论文，该研究所用的SARS-COV-2假病毒是用SARS-COV-2的S蛋白与lentiviral（慢病毒，逆转录科慢病毒属病毒）骨架嵌合制作的，最常用的慢病毒类型的假病毒骨架是去毒性HIV（艾滋病病毒）。 6park.comHEK293细胞，Human Embryonic Kidney Cells 293，人胚胎肾细胞293，一个衍生自人胚胎肾细胞的细胞系； 6park.comHEK293T细胞，在HEK293细胞中加入SV40（Simian vacuolating virus 40，猿猴空泡病毒40）大T抗原基因所得的再衍生细胞系。 6park.comTMPRSS2：Transmembrane Serine Protease 2（跨膜丝氨酸蛋白酶2）/TransMembrane PRoteaSe, Serine 2（跨膜蛋白酶丝氨酸2），SARS-CoV-2、SARS-CoV的S蛋白激活因子，ACE2介导的SARS-CoV-2/SARS-CoV感染需要TMPRSS2作为S蛋白激活因子。 6park.com2、NRP1还促进了SARS-CoV-2假病毒对人结肠Caco-2细胞的感染，对照结果是，NRP1没有促进VSV-G假病毒对Caco-2细胞的感染，如下图所示： 6park.com NRP-1显著提升了SARS-COV-2对HEK-293T细胞的感染能力
6park.com图中蓝色条柱对应SARS-CoV-2假病毒，灰色条柱对应VSV-G假病毒，ctrl（对照组）使用的是未转染NRP1基因的Caco-2细胞。 6park.comCaco-2细胞是一种人类结肠腺癌上皮细胞系细胞，Caco-2细胞自身表达ACE2。 6park.com所用VSV-G假病毒是用VSV（vesicular stomatitis virus，水泡性口炎病毒）的受体结合蛋白--G蛋白与慢病毒嵌合制作的。 6park.com3、NRP1单克隆抗体mAb3可显著抑制SARS-CoV-2对表达NRP1的HEK-293T细胞（同时转染表达ACE2、TMPRSS2和NRP1）的感染，mAb3并不抑制SARS-COV-2对不表达NRP1的HEK-293T细胞（只转染表达ACE2、TMPRSS2）的感染； 6park.com4、对六位Covid-19患者的尸检结果表明，其中五位患者的嗅觉上皮细胞被SARS-CoV-2感染。嗅觉上皮细胞的ACE2表达非常低，但NRP1的表达却很富集。 6park.com论文依据二： 6park.comNeuropilin-1 is a host factor for SARS-CoV-2 infection Neuropilin-1是SARS-COV-2感染的宿主因子 https://www.science.org/doi/full/10.1126/science.abd3072 6park.com论文指出： 6park.com1、（跨膜蛋白）NRP1的b1结构域（NRP1胞外域两个凝结因子域中的一个）直接结合SARS-CoV-2-S的S1亚基的Cendr肽。Cendr肽由SARS-2 S蛋白氨基酸序列的第679~685氨基酸（679NSPRRAR685 ，即679天冬酰胺N-丝氨酸S-脯氨酸P-精氨酸R-精氨酸R-丙胺酸A-精氨酸R）组成，它们恰好是S1亚基的最后七个氨基酸，Cendr肽的后四个氨基酸“RRAR”就是SARS-2的基本furin切割序列。 6park.com下面又是一处新冠巧合，这次不是SARS-2与MERS的巧合，而是SARS-2与人体蛋白的结构、功能巧合。 6park.com2、在NRP1结合特性、结合结构方面，SARS-CoV-2的Cendr肽与一种人体蛋白VEGF-A非常相似。一方面，二者与几乎完全相同的一组NRP1-b1域氨基酸作用并结合；另一方面，Cendr肽、VEGF-A二者与NRP1-b1作用、结合的区域，在空间结构、空间形态上非常相似、吻合，如下图所示： 6park.com NRP1促进了SARS-CoV-2假病毒对Caco-2细胞的感染，但未影响VSV-G假病毒感染
6park.com3、CendR肽与NRP1 b1域之间的相互作用决定NRP1对SARS-CoV-2感染的促进，突变（替换）CendR肽中的氨基酸残基（R685）或NRP1 b1域的氨基酸残基（T316）都将丧失NRP1对SARS-CoV-2感染的促进作用； 6park.com4、NRP1 b1域、b2域的胞外域单克隆抗体mAb#3和mAb#1可抑制SARS-CoV-2对Caco-2细胞和Calu-3细胞（也是一种人肺腺癌细胞系）的感染； 6park.com5、选择性NRP1拮抗剂EG00229可抑制SARS-CoV-2对Caco-2细胞的感染； 6park.com该论文就摘要介绍到此。思考、探讨一下论文所指出的，SARS-CoV-2的CendR肽与人类蛋白VEGF-A的相似性。 6park.comVEGF-A，Vascular Endothelial Growth Factor-A，血管内皮生长因子-A，也叫做血管通透因子（Vascular permeability factor，VPF）或血管调理素（vasculotropin），是一种二聚体糖蛋白，发现于1983年，是发现最早、研究最多、在组织和细胞中含量最丰富的VEGF家族成员（该家族共七个成员）。 6park.comVEGF-A的一个重要特性就是它具有NRP1/NRP2的结合能力，特别是，VEGF-A有非常高的NRP1 b1域结合亲和力，是NRP1 b1域的经典内源性（结合）配体（内源指二者都来自机体内）。2012年的如下论文解析了VEGF-A与NRP1 b1高结合强度的内在结构原因，并指出VEGF-A164（小鼠中的VEGF-A）与Nrp1的结合强度是其与Nrp2结合强度的50倍。 6park.comStructural Basis for Selective Vascular Endothelial Growth Factor-A (VEGF-A) Binding to Neuropilin-1 与Neuropilin-1结合的选择性血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的结构基础 https://www.jbc.org/article/S0021-9258(20)48040-8/fulltext 6park.comSARS-2不仅模仿了MERS的DPP4结合能力、结合机制，还模仿了人类蛋白VEGF-A的NRP1-b1结合能力、结合结构。SARS-2的Cendr肽，与人类的VEGF-A蛋白，结合几乎完全相同的NRP1-b1氨基酸，二者与NRP1-b1作用区域的空间结构、空间形态非常相似、吻合。试问，Cendr肽与VEGF-A的相似、相关性，前者对后者NRP1-b1结合能力、结合结构的模仿，是随机、无目的自然演化的偶然结果吗？ 6park.com新冠病毒的结构、能力巧合与模仿，笔者已经介绍过很多，后继文章中还将出现更多新冠专有的模仿和巧合。 6park.com- 6park.com4、MYH9(NMMHC-IIA) 6park.com- 6park.comMYH9 ：Myosin Heavy Chain 9 ，肌球蛋白重链9，也叫non-muscle myosin heavy chain IIa (NMMHC-IIA或NMHC-IIA)，非肌性肌球蛋白重链IIa，是一种六聚体蛋白，由2个重链亚基MHC，2个碱轻链亚基MLC和2个调节轻链亚基MLC-2组成。 6park.com 左图：SARS-2的CendR肽（蓝色）与人类的VEGF-A（黄色）方框区域的相似性、吻合性 右图：NRP1的b1域与SARS-2 CendR肽的结合复合物示意图；
6park.comMYH9是一种运动蛋白，参与多种需要收缩力的过程，如胞质分裂，细胞迁移、极化和粘附，细胞形状的维持和信号转导等等。 6park.comMYH9在各种人体组织、细胞中广泛表达，在众多组织、细胞中高度表达，包括病毒组织、细胞，特别是各种癌细胞。 6park.com MYH9蛋白空间形态示意图
6park.com MYH9在正常组织、细胞中的表达情况
6park.com以上三张资料图摘自： https://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=MYH9 6park.comMYH9也是HSV-1（herpes simplex virus-1，单纯疱疹病毒1）、EBV（Epstein-Barr virus，爱泼斯坦-巴尔病毒）、PRRSV（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，猪繁殖与呼吸综合症病毒）、SARS-CoV、MERS-CoV等病毒的功能受体或感染促进因子。 6park.com对SARS-CoV-2而言，MYH9是ACE2的辅助受体或共受体，可显著提升ACE2依赖性感染，对SARS-CoV-2感染ACE2低表达的细胞尤为重要；MYH9对SARS-CoV-2感染的促进作用依赖ACE2，但独立于ACE2感染途径的二个S蛋白激活因子TMPRSS2（跨膜丝氨酸蛋白酶2）和CatB/L（cathepsin B and L，组织蛋白酶B和L）。 6park.com论文依据： Nonmuscle myosin heavy chain IIA facilitates SARS-CoV-2 infection in human pulmonary cells 非肌肉肌球蛋白重链IIA促进人肺细胞中的SARS-CoV-2感染 https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2111011118 6park.com论文要点如下（略去了少数不易简明理解的要点）： 1、NMMHC-IIA（MYH9）是ACE2的辅助受体，是促进SARS-CoV-2感染人肺细胞的关键宿主因子，也是泛冠状病毒感染的关键宿主因子。 6park.com2、敲除A549细胞和Calu-3细胞中的MYH9基因显著减少了SARS-CoV-2假病毒对这两种细胞的感染，内源性MYH9（细胞中自然表达的MYH9）的耗竭（敲除）也会降低SARS-CoV和MERS-CoV假病毒的感染。 6park.comA549、Calu-3是两种人类肺泡腺癌细胞系。 6park.com3、MYH9的过度表达（通过转染增加其表达）增强了SARS-CoV-2假病毒对A549和H1299细胞的感染。 6park.comH1299也是一种人类肺腺癌（非小细胞肺癌）细胞系，A549、H1299都是源自2型肺泡细胞的人类肺腺癌细胞系。另说H1299细胞摘取自淋巴结。 6park.com4、MYH9主要在细胞膜上与SARS-CoV-2 Spike共定位，通过其C端（碳端、羧基端、COOH端）结构域（C-terminal domain）与Spike的S2亚基以及S1亚基的N端（氮端、氨基端、NH2端）结构域NTD （N-terminal domain）相互作用（与受体发生作用的区域不只是S蛋白的RBD）。 6park.com MYH9蛋白在病理组织、细胞中的表达情况
6park.com5、细胞中PRA（MYH9的C端结构域）的过表达，对多种冠状病毒进入细胞有着广谱的促进作用，PRA的过表达，不同程度地增强了两种α谱系冠状病毒（HCoV-229E和HCoV-NL63）和三种β谱系冠状病毒（SARS-CoV，MERS-CoV，HCoV-HKU1）的S蛋白假病毒对A549细胞的感染。 6park.com6、肌球蛋白抑制剂ML-7可有效抑制SARS-CoV-2假病毒对PRA-A549细胞的感染。PRA-A549细胞是转染过表达PRA的A549细胞。 MYH9（左图）、SARS-CoV-2 Spike（右图）构成示意图
6park.comC、D两图的纵坐标是实验中测得的细胞中荧光素酶的相对活性（Relative Luciferase activity），实验前荧光素酶基因被嵌入到病毒S蛋白中，其数值指示被感染的细胞的相对数量。 6park.com7、TMPRSS2(跨膜蛋白酶丝氨酸2)抑制剂camostat mesylate（甲磺酸卡莫司他）和CatB/L(组织蛋白酶B和L) 抑制剂E-64d不影响SARS-CoV-2假病毒对PRA-A549细胞的感染；但这两种抑制剂强烈抑制SARS-CoV-2假病毒、SARS-CoV假病毒对Caco-2细胞的感染，并减少了SARS-CoV-2假病毒对野生型A549细胞的感染。即，当细胞不表达PRA或MYH9时，这两种抑制剂可抑制SARS-CoV-2的感染；但当细胞表达PRA或MYH9时，它们不能抑制SARS-CoV-2的感染。这意味着MYH9对SARS-CoV-2感染的促进独立于TMPRSS2和CatB/L。 6park.com 图C：PRA表达增强了SARS-CoV-2假病毒对A549细胞的感染；ML-7抑制了SARS-CoV-2假病毒对PRA-A549细胞的感染； 图D：PRA表达不同程度地增强了五种冠状病毒假病毒对 A549细胞的感染。
6park.com 图A：camostat、E-64d抑制SARS-CoV-2假病毒对Caco-2细胞的感染； 图B：camostat、E-64d抑制SARS-CoV-2假病毒对A549细胞的感染。
6park.com8、内体抑制剂Chloq（氯喹）、NH4Cl（氯化铵）、Baf-A1（巴弗洛霉素-A1）显著抑制SARS-CoV-2假病毒对PRA-A549细胞的感染，它们的抑制作用在较低浓度时已非常强烈，三者在100nM 浓度时就可近乎完全消除感染。 6park.com 图C：camostat、E-64d不影响SARS-CoV-2假病毒对PRA-A549 细胞的感染
6park.com1nM（纳摩尔每升）为10的−9次方mol/dm3（摩尔每升），100nM=0.1μM。 6park.com9、以上几组实验表明，MYH9对SARS-CoV-2感染的促进作用与内吞过程有关，但绕过了CatB/L在内吞中的作用（CatB/L在内体、溶酶体或其它转运体中水解激活S蛋白，促成膜融合、释放RNA），同时不依赖TMPRSS2对S蛋白的激活作用。 6park.com10、如果耗尽（敲除）PRA-A549细胞中的ACE2，则SARS-CoV-2假病毒的感染几乎被消除，ACE2的过表达则增强了SARS-CoV-2假病毒对A549细胞的感染。 6park.com这表明MYH9可能无法充当SARS-CoV-2的独立受体，MYH9对SARS-CoV-2感染的促进依赖于ACE2的存在（至少需要较低表达的ACE2）。 6park.com另一方面，MYH9的耗竭（敲除）也几乎消除了SARS-CoV-2假病毒对A549细胞的感染。 6park.com如下图所示， a) SARS-CoV-2假病毒几乎无法感染各种敲除（KO，Knocking Out）了MYH9或ACE2基因的A549细胞； b) SARS-CoV-2假病毒能感染WT-A549细胞（Wild-Type A549细胞，野生型A549细胞，未作转染或转基因处理的天然A549细胞，该细胞自身表达ACE2和MYH9）； c) SARS-CoV-2假病毒对转染的过表达ACE2的A549-ACE2细胞有更强的感染力。 6park.com 图E：Chloq、NH4Cl、Baf-A1、强烈抑制了SARS-CoV-2假病毒对PRA-A549 细胞的感染
6park.com11、敲除MYH9基因也减弱了SARS-CoV-2真病毒对ACE2-A549细胞的感染。如下图所示： 6park.com SARS-CoV-2假病毒不能有效感染敲除了MYH9或ACE2的A549细胞
6park.comMYH9-KO1、MYH9-KO2是两组敲除了MYH9蛋白基因的ACE2-A549细胞，不清楚二者的区别。 6park.com12、敲除MYH9基因也减弱了SARS-CoV-2真病毒对ACE2-H1299细胞的感染。如下图所示： 6park.com 6park.com图中的MYH9-KO1是敲除（KnockOut）了MYH9蛋白基因的ACE2-H1299细胞。 6park.com13、敲除MYH9基因极大抑制了SARS-CoV-2真病毒对Calu3细胞的感染。如下图所示： 6park.com 6park.comCalu3/Calu-3也是一种人肺腺癌细胞系。 6park.com14、论文总结说，MYH9在SARS-CoV-2感染过程中作为ACE2的共受体而发挥重要作用，它以ACE2依赖性方式通过内吞作用介导SARS-CoV-2进入宿主细胞，MYH9-PRA对SARS-CoV-2感染的促进与TMPRSS2和CatB/L无关。 6park.com该论文有中文报道： 徐建青_张晓燕团队《PNAS》报道MYH9是SARS-COV-2感染的共受体——增强ACE2依赖性内吞作用以促进感染 https://ibs.fudan.edu.cn/76/26/c24338a423462/page.htm 6park.com（未完待续） 6park.com贴主:苦难与荣耀于2023_07_12 16:00:34编辑 6park.com贴主:苦难与荣耀于2023_07_12 23:41:01编辑 6park.com贴主:苦难与荣耀于2023_07_16 10:37:53编辑
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