| 送交者: droobook[★★基因学砖家★★] 于 2020-02-08 22:26 已读 3340 次 5 赞 | droobook的个人频道 |
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6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com比如我面前有一管疑似病人的血样，除了自己做好防护外，怎么确定这个人有没有感染？
6park.com黄金标准方法是检测核酸。但具体怎么检测呢？ 6park.com
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第一步，确定病人的样品合格（质量控制）。
6park.com也不一定要血样，其他可以接受的样品包括：鼻腔，口腔，支气管肺泡灌洗液，等。但标识要清楚明白（不要小看这个，细心，彻底是干这行的重要品质）。就算冰箱保存，也不能超过72小时。如果非要保存更长时间，要冻存于零下70度的冰箱。不合格的样品，一定要打回重新采集，否则检测的结果也不可靠。
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第二步，提取样品中的RNA
6park.com新冠病毒是RNA病毒，高质量的RNA提取是成功的基础。这个需要至少BSL-2的实验室里做。普通实验室是BSL-1，最高是BSL-4。具体的提取方法，有很成熟的试剂盒。但需要训练有素的专业人员，还有一整套的分子生物学工具。比如：离心机，移液枪，手套，试管等等。
6park.com提取完需要质量控制，不合格的要重来。
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第三步，需要准备好做检测的试剂盒。
6park.com这里需要的都是消耗品，所以一个合格的检测中心，需要准备充足的量。很多人觉得这个试剂盒是高大上的东西，其实相对来说是最便宜的部分。也根本不需要专利，美国CDC对这个信息是全面披露的。
6park.com网上看到很多公司的检测试剂盒都是捐赠的，一方面绝对要表扬他们提供的技术，人力和物质贡献，另一方面，其实这些东西真的不贵。比如一个引物（就是表格里的primer，长成 AGC TGC AATT那样的），能测上千个样品，五美金左右，老顾客买多了还有优惠。。。
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第四步，rRT-PCR
6park.com前面都是准备，这一步才是真正的检测。最关键的是，需要一台能做rRT-PCR的仪器。比如，我自己用的仪器，大概长下面这样。（图来自网络）
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把第二步得到的RNA，和第三步的检测试剂混在一起。当然具体怎么混是有严格要求的，训练有素的人来做，精确到至少微升级别（10的负6次方）。放进仪器里，反应2-3个小时，就能出结果。
6park.com具体原理就不详细讲了：1. RNA合成DNA。 2. 扩增DNA，链式反应，2-4分钟左右一轮，每轮荧光信号增长一倍。3. 每轮拍照，看荧光信号增长了多少。 4. 大概扩增30-45轮。
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第五步，分析结果。
6park.com检测一定要包括，样品本身，阳性对照，阴性对照。
6park.com1. 样品肯定要的，否则检查啥？严格要做三个重复，保证结果可靠。
6park.com2. 阳性对照：这个很重要。因为一个反应都涉及数十种试剂和条件，一个搞错，都可能导致结果错误。阳性对照的意义是保证这些试剂和条件都是对的，否则样品测成什么样都没意义。一般用已知的提纯病毒DNA。
6park.com3. 阴性对照：一般用实验级别的纯净水。这个保证没有污染，免得测什么都是阳性。
6park.com下面的图有点乱，看不懂不是教育系统的错，只是你不是专业人士。总之样品跟阳性对照类似说明携带病毒。跟阴性对照相似，需要再测一遍。两遍都是阴性，说明基本不带病毒，回家隔离，以防万一。
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最后想说： 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com 6park.com记得笔名美女很早就写文章警告：真正感染的人远大于确诊，因为缺少核酸检测，不能确诊。后来多方消息证明的确有这种情况。
贴主:droobook于2020_02_08 22:38:26编辑评分完成：已经给 droobook 加上 500 银元！
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